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　（三） 抗體(ti) 的酶標記方法及標記效果測定 　　1.標記方法 良好的酶結合物取決(jue) 於(yu) 兩(liang) 個(ge) 條件：即高效價(jia) 的抗體(ti) 和高活性的酶。抗體(ti) 的活性和純度對製備標記抗體(ti) 至關(guan) 重要，因為(wei) 特異性免疫反應隨抗體(ti) 活性和純度的增加而增強。在酶標記過程中，抗體(ti) 的活性有所降低，故需要純度高、效價(jia) 高及抗原親(qin) 和力強的抗體(ti) 球蛋白，使用親(qin) 和層析提純的抗體(ti) ，可提高敏感性，而且可稀釋使用，減少非特異性吸附。 　　酶與(yu) 抗體(ti) 交聯，常用戊二醛法和過碘酸鹽氧化法。郭春祥建立的HRP標記抗體(ti) 的改良過碘酸鈉法簡單易行，標記效果好，特別適用於(yu) 實驗室的小批量製備。其標記程序為(wei) ：將5μg HRP溶於(yu) 0.5ml蒸餾水中，加入新鮮配製的0.06 mol/L的過碘酸鈉（NaIO4）水溶液0.5ml，混勻置4℃冰箱30分鍾 ， 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml，室溫放置30分鍾後加入含5（g純化抗體(ti) 的水溶液1ml，混勻並裝透析袋，以0.05mol/L、pH9.5的碳酸鹽緩衝(chong) 液於(yu) 4℃冰箱中慢慢攪拌透析6小時（或過夜）使之結合，然後吸出，加硼氫化鈉（NaBH4）溶液（ 5（g/ml）0.2ml，置4℃冰箱2小時，將上述結合物混合液加入等體(ti) 積飽和硫酸銨溶液，置4℃冰箱30分鍾後離心，將所得沉澱物溶於(yu) 少許0.02mol/L、pH7.4PBS中，並對之透析過夜（4℃），次日離心除去不溶物，即得到酶標抗體(ti) ，用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml，進行測定後，冷凍幹燥或低溫保存。 　　2.酶標抗體(ti) 標記效果測定：測定內(nei) 容包括酶和抗體(ti) 活性、結合物中酶含量和IgG含量、酶與(yu) IgG摩爾比值以及結合率。  　

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